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技術(shù)文章

PCR的技術(shù)步驟

技術(shù)文章

PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction)的縮寫,它是體外酶促合成特異(DNA)片段的方法。這一方法的要點(diǎn)是合成兩個(gè)分別互補(bǔ)于待擴(kuò)增(DNA)片段兩端的小片段引物,在含有引物、待擴(kuò)增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應(yīng)體系中DNA復(fù)制反復(fù)進(jìn)行,在短時(shí)間內(nèi)可以取得大量擴(kuò)增產(chǎn)物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸,合成兩個(gè)與靶DNA兩側(cè)序列互補(bǔ)的引物,在體外進(jìn)行靶DNA的重復(fù)合成。

主要的技術(shù)步驟是:
(1)DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
(2)引物與靶DNA退火 適當(dāng)降低溫度,使兩個(gè)引物分別結(jié)合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
(3)引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離后,又可作為模板與引物雜交,并且在DNA聚合酶的催化下,引導(dǎo)合成新的靶DNA鏈。如此反復(fù)進(jìn)行以上3個(gè)步驟,即可使靶(DNA)片段指數(shù)性擴(kuò)增。

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